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       细胞冻存液氮罐的具体操作步骤和细胞复苏流程

　　大量细胞如何储存在液氮罐里，液氮罐里一般灌有低温液氮，细胞的储存需要低温环境，放入-196度的液氮里对细胞是长期保存的一个适合的环境。细胞冻存液氮罐是将细胞存入液氮罐的液相里储存，有专用的方形抽屉式提篮，2ml冻存管放入冻存盒然后再放入提篮后浸入液氮里，*浸入。使细胞*处于液氮-196度环境下，才能够长期保存细胞。

　　细胞冻存液氮罐的具体操作步骤：

　　1、培养皿或培养瓶中细胞按常规方法消化，或分离获得原代细胞后，收集于离心管中。

　　2、使用离心机离心，去除上清，收集细胞沉淀。

　　3、根据细胞生长密度加入适量的LiveCyteTM细胞冻存液进行重悬，充分混匀。

　　4、将细胞悬液分装至冻存管中，直接放置于-80°C冰箱保存。24小时后可移入液氮长期保存(可选)。

　　细胞冻存液氮罐的细胞复苏流程：

　　1、从-80°C冰箱或液氮罐中取出细胞。

　　2、迅速放入37°C水浴，并不时摇动，在3分钟之内使其*融化。

　　3、在冻存管中加入少量*培养基，再将细胞混合液移入含有该细胞*培养基的离心管中，样品和培养基比例为1：10，然后轻轻吹打，混合均匀。

　　4、离心后去除上清，收集细胞沉淀。

　　5、轻轻弹松细胞沉淀，加入适量培养液后接种于培养瓶或培养皿中，轻轻晃动使细胞分布均匀，置于37℃孵箱中培养。